細胞名稱

LX-2（人肝星形細胞）

種屬

人

年齡（性別）

組織來源

生長特性

貼壁

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

背景描述

生長培養(yǎng)基

DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S                                            

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO₂，5%

溫度：37℃

培養(yǎng)液pH值變化太快 

可能原因

建議解決方法

1.CO2張力不對

按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應(yīng)CO2濃度為5%到10%。

2.培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊

松開瓶蓋1/4圈。

3.NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足

改用不依賴CO2培養(yǎng)液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃。

4.培養(yǎng)液中鹽濃度不正確

在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hank人肝星狀細胞LX-2，性能參數(shù)說明書鹽配制的培養(yǎng)液。

5.細菌、酵母或真菌污染

丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。

 培養(yǎng)細胞死亡 

可能原因

建議解決方法

1. 培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2

檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2

2. 培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大

檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度

3. 細胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷

取新的保存細胞種

4. 培養(yǎng)液滲透壓不正確

檢測培養(yǎng)液滲透壓。注意：大多數(shù)哺乳動物細胞能耐人肝星狀細胞LX-2，性能參數(shù)說明書，受滲透壓為260– 350   mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。

5. 培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積

換入新鮮培養(yǎng)液